火影忍者中大蛇丸死过两次，第一次是被宇智波佐助杀死，第二次是被宇智波鼬杀死。具体过程如下：
不尸转生的三年期限结束后，大蛇丸身体极其虚弱，连兜的药也救不了他。此时他认为是时候利用佐助的身体进行灵界转生。
佐助认为大蛇丸该教他的全都学会了，没有什么利用价值，故先发制人，冲进大蛇丸房间进行刺杀。
大蛇丸不甘示弱，使用白蛇使役术将自己变为体型庞大的巨蛇，打算通过此术占据佐助的身体。但因身体虚弱，不敌佐助的写轮眼，最终被佐助吸收，灵魂与力量被完全压制。
佐助与鼬战斗时，由于查克拉耗尽而释放出大蛇丸。大蛇丸重见天日后本欲与鼬一较高下。
结果被自己苦心寻找的十拳剑封印，保命用的小白蛇也被鼬的天照烧死。
